高光祖，字耀宗，１９０４年農歷十一月出生于陜西省佳縣店鎮神堂溝村一個貧苦的農民家庭。１９１５年至１９２２年，他先后在本村私塾和店鎮高小上學。

１９２３年，高光祖考入陜西省立第四師范學校（以下簡稱“四師”）。第二年，陜北革命領袖李子洲擔任四師校長，聘請革命同仁王懋廷來校任教，立志將四師變為陜北共產主義運動的主陣地。高光祖在王懋廷等老師的影響下，閱讀進步刊物，從事群眾運動，１９２５年加入了中國共產黨。

高光祖自投身革命后，工作非常積極。１９２５年夏，他聯合綏德縣泥水匠、木匠、石匠等手工業匠人，成立了綏德縣手工業工人工會，使陜北工人第一次有了自己的組織。１９２６年，他和佳縣旅外同學創辦“振佳會”和《振佳》刊物，在家鄉宣傳進步思想。此外，他還參與平民學校的工作，白天上課，晚上開設黨團組織訓練班，為革命培訓了大批骨干。

１９２６年農歷六月，高光祖從綏德四師畢業，被派往蟠龍鎮安定縣立第四高小當教師，擔任黨的特別支部書記。他在這里積極發展黨員，建立黨的組織和農民協會。１９２７年暑假，高光祖回到佳縣，參與領導中共佳縣縣委，并與縣委書記杜嗣堯一起籌備召開了縣農民協會代表大會。

大革命失敗后，“土皇帝”井岳秀在陜北厲行“清黨”，佳縣縣委解散，高光祖等人隱蔽起來。１９２７年１１月，在神堂溝村召開了全縣黨員代表會議，高光祖被選為縣委書記。到１９３０年夏，高光祖兩次擔任佳縣縣委書記的職務，期間他還到綏德苗家坪高小教學，在雙湖峪、三皇峁、周家崄一帶開展黨的工作，到佳縣坑鎮、螅鎮以教學為掩護從事黨的事業。１９３１年冬后，國民黨對高光祖監視很嚴，他不便繼續領導縣委工作，回家種地，從事秘密活動。

１９３４年，高光祖重新回到佳縣縣委工作。他和曹世華一起領導紅六支隊，在佳縣南部一帶開展武裝斗爭。從這年冬季開始，敵人瘋狂“圍剿”佳縣紅區。在敵強我弱的形勢下，為了集中力量打擊敵人，１９３５年２月，高光祖與吳堡縣慕生桂等協商，并經上級批準，將佳吳兩縣的武裝力量紅六、紅十五支隊合編為獨立五團。

獨立五團建立不久被調離佳吳地區，高光祖又與曹世華、馬增前等人籌劃成立新的紅六支隊。１９３５年農歷二月二十日晚，高光祖等人夜宿店鎮附近棗林溝村的一個山窯里，叛徒李友仁連夜去店鎮向敵駐軍郭福堂部告密。敵軍于拂曉時將山窯包圍，大聲喊話，勸他們投降。高光祖等奮起抵抗，在突圍中壯烈犧牲，年僅３１歲。